體內(nèi)/體外實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中抑制劑的添加
ED50，Ki50，IC50，Kd50和pIC50各指什么?它們有什么區(qū)別
藥理和生化研究中，以下一些術(shù)語(yǔ)常常被用來(lái)描述藥物或抑制劑的功效;有時(shí)如果研究者沒(méi)有弄清 原文獻(xiàn)作者使用的術(shù)語(yǔ)的確切含義，在重復(fù)這些實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生困擾。 EC50值:藥物達(dá)到最大臨床功效(有時(shí)是抑制或刺激效果)50%時(shí)的濃度。這是一個(gè)藥用術(shù)語(yǔ)。 ED50值:50%的個(gè)體表現(xiàn)特定藥效時(shí)藥物的有效劑量(而非濃度)。
IC50值: 達(dá)到50%抑制效果時(shí)抑制劑的濃度。
Ki50值: 檢測(cè)到50%抑制效果時(shí)的抑制劑的濃度(采用Michaelis-Menten動(dòng)力學(xué)計(jì)算而獲得)。
Kd50值:二個(gè)或更多生物分子組成的復(fù)合物分離成組分時(shí)的平衡常數(shù);例如，抑制劑或底物從酶分離時(shí)的pIC50值。
pIC50值:IC50值的10的負(fù)對(duì)數(shù)。
2. 體外實(shí)驗(yàn)中需要加多少抑制劑?
通常建議客戶(hù)參考同模型實(shí)驗(yàn)發(fā)表的文獻(xiàn)報(bào)道；
除參考文獻(xiàn)報(bào)道以外，還需要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)做“劑量-效應(yīng)曲線”確定最佳作用濃度（濃度梯度）；通過(guò)“時(shí)間-效應(yīng)曲線”確定最佳孵育時(shí)間（處理時(shí)間梯度）。
另外，抑制劑的使用量受多種因素影響，包括抑制對(duì)象的可接觸性，細(xì)胞通透性，孵育時(shí)間，細(xì)胞種類(lèi)等等。我們建議通過(guò)檢索文獻(xiàn)確定使用抑制劑的起始濃度。如果有報(bào)道的Ki值或IC50值，可以采用其5-10 倍的量開(kāi)始嘗試以達(dá)到抑制酶活性的最佳效果。如果抑制劑的Ki值或IC50值未知，則需要在更廣泛的范圍嘗試抑制劑的使用濃度，并采用Michaelis-Menten動(dòng)力學(xué)計(jì)算Ki值。一般設(shè)立溶解抑制劑時(shí)所采用的溶劑作為對(duì)照，以排除溶劑的非特異性影響。
3. 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)需要注射多少抑制劑或者刺激藥物呢?
需要通過(guò)一些經(jīng)驗(yàn)性的預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)獲得試劑的優(yōu)化劑量。首要考慮是這種試劑必須具備細(xì)胞穿透性。檢索報(bào)道過(guò)的IC50值，ED50值或EC50值也非常必要。以下介紹一個(gè)抑制劑用量的常用估算方法:
注射量(μg)=IC50(nM)×5~10×分子量×體重(g)×體液占體重的百分?jǐn)?shù)(%)×10-6
以H-89(一種二氫氯化物)為例。這是一種細(xì)胞穿透性蛋白激酶A抑制劑，IC50值為48nM，分子量是 519.3，240-480nM可以產(chǎn)生足夠的蛋白激酶A的抑制效果?；铙w(in vivo)實(shí)驗(yàn)時(shí)我們還需要做一些估算。假定一只200g的大鼠含水量為70%，則抑制劑約在140ml中分布;這樣240nM =240nmoles/L= 124.63μg/L。抑制劑溶于140ml，即124.63×0.140 = 17.45μg，所以這只200g的大鼠需要注射的劑量為17.45μg。
同時(shí)，抑制劑在體內(nèi)的實(shí)際分布與注射方式(靜脈注射，肌肉注射還是腹腔注射?) 藥物利用率，半衰期，肝腎清除率，與蛋白的結(jié)合，組織特異性分布與富集等等緊密相關(guān)。特定組織或器官吸收抑制劑的量也往往比分離的細(xì)胞吸收量少。在整個(gè)活的動(dòng)物體上的研究，常常要求抑制劑達(dá)到一定的目標(biāo)濃度的負(fù)荷劑量，因此也需要通過(guò)持續(xù)給藥以保持血液中相應(yīng)的抑制劑濃度。做這類(lèi)實(shí)驗(yàn)必須特別小心，以免在動(dòng)物上用藥過(guò)量。
客服一
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