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    貨號(hào):2430090
    支原體檢測(cè)試劑盒(PCR法)
    英文名:
    別名:
    CAS號(hào):MDL號(hào):分子式:分子量:
    支原體檢測(cè)試劑盒(PCR法)
    產(chǎn)品名 支原體檢測(cè)試劑盒(PCR法) 
    別名  
    英文名  
    CAS號(hào)
    分子式  
    分子量  
    EINECS編號(hào)  
    MDL號(hào)  

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞各個(gè)方面都造成不良影響,已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)中高度重視的問(wèn)題,因此,定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè)是十分必要的。
    本支原體檢測(cè)試劑盒是采用PCR方法,特異性的檢測(cè)各種培養(yǎng)細(xì)胞生物材料(如細(xì)胞培養(yǎng)物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物、動(dòng)物血清等)中支原體的污染。
    試劑盒使用的混合引物是針對(duì)支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)的特異性引物,可直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液作為PCR模板,特異性擴(kuò)增支原體DNA,
    搭配配套的Mycoplasma PCR Mix(2×)一小時(shí)內(nèi)即可完成,本試劑盒檢測(cè)靈敏度高,可檢測(cè)低至20個(gè)拷貝的支原體。


     

    操作步驟

    1. 樣品準(zhǔn)備:取適量待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用Mycoplasma Free Water稀釋后,取適量樣本于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板;

    2. PCR體系配制:每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照(將1 μL待檢樣品換成等量的Mycoplasma Free Water)與陽(yáng)性對(duì)照(在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為T(mén)emplate),實(shí)驗(yàn)時(shí)戴一次性口罩與手套,謹(jǐn)慎操作,防止操作不當(dāng)引入外源支原體污染;

    Component

    Volume

    Template

    1 μL

    Mycoplasma Primer Mix

    2 μL

    Mycoplasma PCR Mix(2×)

    10 μL

    Mycoplasma Free Water

    To 20 μL

    3. PCR程序設(shè)置

    Step

    Temperature

    Time

    Cycles

    Initial Denaturation

    98℃

    2 min

    1

    Denaturation

    98℃

    20 s

    30

    Annealing

    56℃

    25 s

    Extension

    72℃

    10 s

    Final extension

    72℃

    5 min

    1

    Hold

    4-16℃

    Forever

     

     

    4. 凝膠電泳:取10 μL PCR產(chǎn)物,使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè);

    5. 結(jié)果分析:每次實(shí)驗(yàn)通過(guò)與陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)結(jié)果比較確認(rèn)樣品支原體污染情況,陽(yáng)性條帶大小500 bp左右。如陰性對(duì)照檢測(cè)結(jié)果中有條帶很有可能是PCR體系中出現(xiàn)污染,建議重新實(shí)驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果。如有必要,也可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)測(cè)序,以確定具體的支原體種屬。

     


    注意事項(xiàng)

    1. 本試劑盒可以檢測(cè)M.orale,M.arginini,M.bovis,M.fermentans,M.gallisepticum,M.hominis,M.pirum,Ureaplasma spp,M.hyorhinis,M.pneumoniae,A.laidlawii等至少11種以上支原體污染。

    2. 所有試劑在使用前于冰上徹底解凍、混勻,使用完畢后于-20℃保存。

    3. 每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照,實(shí)驗(yàn)組建議設(shè)置樣品模板梯度。

    4. 操作時(shí)必須佩戴口罩,嚴(yán)格按照PCR操作標(biāo)準(zhǔn),防止引入外源污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    5. 為了確保細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的可靠性及穩(wěn)定性,建議定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè)。

    6. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


    儲(chǔ)存與運(yùn)輸

    冰袋(wet ice)運(yùn)輸;-20℃保存,有效期12個(gè)月。

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